液相色譜儀操作的一些問題
抖化學 / 2022-11-07
溶劑的精制
只要可能，就應使用全玻璃系統蒸餾過的溶劑，并應通過硅膠床精制。一根直徑76.2毫米( 3英寸)長1.2米，填充了大約250毫米粗硅膠的柱，應能精制4.5升(1加侖)左右的溶劑。用
于純制目的的硅膠，不應使用到完全失效，因為如果太多的溶劑通過柱床時，雜質就會象在正常的液相色譜展開中那樣從精制柱中流出。
泵的問題
泵的問題通常起因于隔膜型或活塞型泵，常由于改變包括不相混溶液體的流動相而產生。其癥狀是或者完全失去壓力沒有泵液作用，或者泵的輸出壓力波動。如將流動相直接從庚烷換成水，幾乎肯定會引起止逆閥的小球粘著，而導致失去壓力。這個問題可用泵使丙酮通過系統而解決。因丙酮與庚烷及水均可互溶。用一種與先前采用的所有流動相均能混溶的溶劑通過泵以洗凈阻塞的止逆閥的原理，是一種通用的方法。有時止逆閥被硅膠的小顆粒卡住而密封不嚴。這是由于用作流動相的溶劑未曾仔細濾過。這些硅膠顆粒常常難以除去，必須將止逆閥在盛于超聲浴的丙酮中清洗。如果變換溶劑時只用可混溶的溶劑，同時在溶劑的制備方面又注意充分保證色譜系統的清潔，則由泵所引起的故障就非常之少。
注射樣品的問題
連續的柱頭注樣進入固定相床，最終，將導致對柱床的擾動而使效率劣化。這可由在填充物的頂上鋪一層10毫米厚的玻璃微珠(直徑約40微米)而得以克服，因為對玻璃珠床的擾動將不會明顯地影響性能。玻瑞珠床亦有助于注射的樣品沿柱徑向分配。
另一方面，樣品可如前所述那樣，注射到位于填充物頂上的不銹鋼多孔燒結板上。如果使用樣品閥，在將樣品裝入環管以備進樣之前，至少應先以10倍體積的樣品溶液沖洗環管。這將保證除去
遺留在環管中的先前的任何痕量樣品。
檢測器的問題
關于檢測器的一個主要問題，是氣泡留在檢測池中，共表現是峰持久地超出刻度。氣泡在柱內的產生，通常由流動相極性的突然變化所引起。氣泡的形成，最常見于醇~水混合液。為了消滅氣泡的形成，溶劑應在分析之前進行脫氣。僅將溶劑在真空下振搖就可很容易地脫氣。如有氣泡粘著在檢測器池中，有兩種常用的辦法可除去它。(1)柱的流速應顯著增大，并將檢測池的出口封住，通常是用手指堵住。這樣在檢測池中建立起壓力，氣泡體積減小而可以通過池終端的縮口部分。然而應小心勿使檢測器中產生很大的壓力，因為這可能破壞檢測池的密封(通常為聚四氟乙烯封墊)，引起池子泄漏。(2)如上一個方法失敗，則應松開檢測器和柱之間的聯接，用極性溶劑如丙酮反沖洗除去空氣。最好用充滿丙酮的皮下注射器聯接在池的出口來完成這一操作，當氣泡已被除去，柱和檢測器之間的接頭被擰緊之后，注射器才能卸下。
為了減少氣泡停留在檢測池中的幾率，可將柱子聯到池的底部，使流出液向上通過池子，并經一個倒置的U形管流出。與另一種聯接方法相反，這樣對池子加上一個流體靜反壓，減少了氣泡的體積，使之更容易通過池子。
基線不穩
基線不穩定可有短周期噪聲、長周期噪聲、漂移或這些三種效應中的任何組合形式(見附錄I )。
漂移，如其名字所示，是記錄筆緩慢地漂過記錄紙。漂移通常起因于柱子在更換溶劑后沒有完全達到平衡。連續使溶劑流過一段時間之后應能消除漂移。如果是使用液一液色譜法，漂移經常起因于固定相的流失，這一點可由保證進入柱子的流動相在柱溫下對固定相完全飽和而得以消除。漂移的另一來源，起因于溫度變化。如果溶劑貯槽重新裝滿不同溫度的新鮮溶劑，這可在柱中產生輕微的熱梯度，直至達到溫度平衡之前，將引起對溫度敏感的檢測器如折光率檢測器、某些情況下還有UV檢測器呈現漂移。
短周期噪聲可從記錄圖上的“頓抖”而得以辨認。這種不穩定性，通常起因于記錄儀不正確的靈敏度調節或放大器的不穩定性。如噪聲來自記錄儀，正常的調節通常將能使之消除，但如來
自放大器，則建議請制造廠家進行檢修。
長周期噪聲，定義為具有相當于流出峰的頻率的基線不穩定性，其范圍可從幾秒鐘到近于1分鐘。這一類型的噪聲是最嚴重的，因為它是限制檢測器靈敏度的因數。這種噪聲與流出峰無法識別一一它可起因于各種來源，如柱的流失，沾污的柱，溶劑的雜質和溫度的波動。保證-個色譜系統的絕對清潔可使它降低至最小值，但并不能完全消除，因此它是制約著檢測器最大靈敏度的根本因數。在檢測器設定靈敏度的最大值，長周期噪聲不應大于滿刻度偏轉的1或2 %。
假峰
一個色譜圖的解釋，常常可被突然出現的假峰弄得混亂。它們可由一些不同的來源所引起。
沾污的注射器
被先前樣品沾污了的注射器，可能是引起假峰的最普通的原因。注射器應在每次采樣之間仔細地洗凈，1微升的注射器更需特別注意。如果可能，它們應在減壓條件下，以大量溶劑清洗。
樣品物質常常爬到注射器芯子后面，在連續取樣時再慢慢洗濾出來。
沾污的隔膜
隔膜可吸附某些樣品，當注射器刺穿隔膜時就將痕量的先前的樣品帶到柱上。這一來源的假峰，可由更換隔膜而得以消除。
溶于樣品中的空氣
溶于樣品中的空氣，將在樣品被注人那點，使溶劑的折光率發生變化，當此溶劑流出時，可使折光率檢測器和UV檢測器都產生響應一-UV檢測器對折光率也和對溶質吸收一樣敏感。在真空條件下輕輕振播以除去溶于樣品的空氣，將消除這一效應。
樣品溶劑的流出
只要可能，樣品任何時候都應溶解于流動相,但有時由于溶質的溶解度太差而不可能這樣做。在此情況下，常常采用極性更大的溶劑，當樣品被注到柱上時，不同的溶劑分別流出而形成假峰。即使流動相保持著原來的成分，但極性更強的組分濃度的增大，仍將使假的溶劑峰出現。例如，假定所用流動相是含5%乙酸乙酯的庚烷，為了得到適當的溶解度，樣品溶于含10%乙酸乙酯的庚烷，則由于增大的乙酸乙酯的濃度脈沖，將以完全與空穴色譜法的同一方式被洗脫，所以色譜圖仍將顯示一個溶劑假峰。
如果必需使用極性更強的樣品容劑以保證溶解度，假峰就無法消除，只能把它作為假峰而予以忽視。
檢測器的頂替效應
這一效應不是引起假峰的經常原因，但有時能混淆結果。共起因在于流動相中極性更強的溶劑吸附在玻璃或石英檢測器池壁上成為一個薄層。當一個極性溶質被洗脫時，可頂替出此吸附層而產生-一個畸形的峰。這一.效應也難以消除，但在有些情況下，可在流動相中用一個較低濃度的、更強的極性溶劑來實現此目的。例如含10%乙酸乙酯的庚烷溶液會被含3%四氫呋哺的庚烷溶液所頂替。變換的原理已在論述溶質一溶劑相互作用的一章(第3章)中闡明。
液相色譜儀操作步驟
先對流動相進行過濾，根據需要選擇不同的濾膜，一般為有機系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。然后對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。一般情況下，流動相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩定，zui重要的是儀器基線走后，方可進樣測試。
液相色譜儀注意事項
流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。壓力不能太大，不要超過150kgf/cm2 。
.jpg "液相色譜儀操作流程")
閩ICP備15011996號-4
|
閩公網安備35040002000218號
|
